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適用范圍?

維生素 B5 (泛酸)檢測(cè)試劑盒適用于奶粉中添加泛酸（維生素B5）含量的定量分析。該試劑盒可進(jìn)行96次測(cè)定。?

實(shí)驗(yàn)原理

泛酸（維生素B5）檢測(cè)試劑盒采用微生物方法定量檢測(cè)奶粉中添加泛酸的含量。微生物檢測(cè)體系與國(guó)際規(guī)范保持一致。植物乳桿菌的生長(zhǎng)離不開(kāi)泛酸，其生長(zhǎng)強(qiáng)度與樣品中泛酸的含量有關(guān)，將含有植物乳桿菌的泛酸檢測(cè)培養(yǎng)基、樣品或標(biāo)品加入到微孔中，37℃避光孵育，植物乳桿菌開(kāi)始生長(zhǎng)，直至泛酸被完全消耗，24小時(shí)完成孵育。采用酶標(biāo)儀讀取610-630nm或540-550nm下樣品的渾濁度，將樣品濁度與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比即可得到樣品中泛酸含量。

1、標(biāo)準(zhǔn)品配制?

1）打開(kāi)無(wú)菌水瓶蓋：沿著箭頭方向向上推開(kāi)藍(lán)色蓋帽，逆時(shí)針拉開(kāi)鋁塑蓋，取下整個(gè)蓋帽，然后打開(kāi)瓶塞，將瓶塞內(nèi)側(cè)朝上放置。

2）打開(kāi)泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品瓶蓋，取xmL無(wú)菌水加入標(biāo)準(zhǔn)品瓶中（x值見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品瓶包裝標(biāo)簽），蓋上瓶蓋，振蕩使標(biāo)準(zhǔn)品充分溶解，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

3）取6個(gè)無(wú)菌管（1.5或2.0mL），將標(biāo)準(zhǔn)品工作液按照說(shuō)明書表格進(jìn)行稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品必須現(xiàn)配現(xiàn)用。?

?*標(biāo)注曲線中已經(jīng)包含樣品40倍的提取稀釋倍數(shù)。?

2、檢測(cè)培養(yǎng)基的配制?

1）打開(kāi)培養(yǎng)基瓶蓋，用無(wú)菌鑷子取出干燥劑并丟棄。?

2）將10mL無(wú)菌水（必須取自試劑盒中）加入泛酸檢測(cè)培養(yǎng)基瓶中，蓋緊瓶蓋，振蕩混勻。?

3）保證瓶蓋密閉的前體下，95℃水浴加熱5min，然后快速冷卻至室溫（低于30℃）。?

4）使用0.22μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾全部培養(yǎng)基，用15mL無(wú)菌離心管收集全部濾液。?

5）取出凍干菌株，沿著箭頭方向向上推開(kāi)藍(lán)色蓋帽，逆時(shí)針拉開(kāi)鋁塑蓋，取下整個(gè)蓋帽，輕輕打開(kāi)瓶塞，將瓶塞內(nèi)側(cè)朝上放置；向菌株瓶?jī)?nèi)加入1mL無(wú)菌水（必須取自試劑盒中），用移液槍吹打混勻，取其中的YmL（Y值見(jiàn)菌株包裝瓶標(biāo)簽）加入過(guò)濾后的培養(yǎng)基中，振蕩混勻，即為檢測(cè)菌液（檢測(cè)菌液須現(xiàn)配現(xiàn)用）。?

注：如果培養(yǎng)基在處理的過(guò)程中出現(xiàn)較大體積的損失時(shí)，加入的凍干菌株體積需要做相應(yīng)比例的調(diào)整。為杜絕實(shí)驗(yàn)室污染，菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封，及時(shí)清理出實(shí)驗(yàn)室或者高壓滅菌處理；制備的檢測(cè)菌液如有剩余，也需要及時(shí)清理出實(shí)驗(yàn)室或者高壓滅菌處理。?

3、檢測(cè)步驟

注：加入微孔板中的樣品必須為無(wú)菌樣品（使用試劑盒中提供的無(wú)菌水進(jìn)行稀釋）。?

1）取出所需數(shù)量的微孔條置于微孔架上，將剩余微孔板條放回鋁箔袋中密封，2-8℃儲(chǔ)存。?

2）依次將140μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、140μL檢測(cè)菌液加入微孔中（用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液潤(rùn)洗槍頭），然后用粘膠薄膜蓋好微孔條（揭開(kāi)粘膠薄膜的保護(hù)層，用手或壓舌板將粘膠薄膜壓平，使其充分封閉微孔板條）。注:保證粘膠薄膜和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分。?

3）在37℃培養(yǎng)箱中避光孵育24小時(shí)。?

4）輕輕來(lái)回顛倒混勻微孔板，使菌液充分混勻，然后用一只手將微孔條固定于微孔架上，另一只手自右上方沿對(duì)角揭開(kāi)粘膠薄膜，靜置2min待氣泡全部消去（較難消去的小氣泡用移液槍吸出）后用酶標(biāo)儀在610-630nm或540-550nm下測(cè)量渾濁度。?

注：孵育完成后，微孔板可在冰箱中保存的最長(zhǎng)時(shí)間為48h，然后用酶標(biāo)儀讀數(shù)。