本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔上預包被多拉菌素抗原,樣本中殘留的多拉菌素和此抗原競爭多拉菌素的抗體(抗試劑),加入酶標二抗(酶標物)后,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含多拉菌素的含量呈負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中多拉菌素的含量。
適用范圍
可定性、定量檢測生鮮乳樣本中多拉菌素的含量。
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25°C)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8°C。切勿冷凍。
3、洗滌液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本:加入標準品/樣本100μL到對應的微孔中,然后加多拉菌素抗試劑50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應30min6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250μL/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、加酶標物:加入多拉菌素酶標物100μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應30min,取出重復步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50μL/孔,再加底物液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應15min(見注意事項8)。
9、測定:加入終止液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
結果判定
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