鏈霉素(Streptomycin,STR)是一種氨基糖苷類抗生素,如果使用不當(dāng)或停藥時(shí)間短,鏈霉素可能會(huì)超量殘留于動(dòng)物源食品中。食品中低濃度鏈霉素殘留會(huì)引起過(guò)敏,損傷腸內(nèi)有益菌群,而高濃度鏈霉素會(huì)引起耳和腎中毒,對(duì)過(guò)敏胎兒更為嚴(yán)重。過(guò)去鏈霉素殘留一般采用氣相色譜法測(cè)定,但此方法昂貴又費(fèi)時(shí),本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),操作時(shí)間需45分鐘,能減少工作強(qiáng)度和操作誤差。
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8℃。切勿冷凍。
3、洗滌液在使用前也需回溫。
4、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μL/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中,再加入鏈霉素酶標(biāo)物50μL/孔,再加入鏈霉素抗試劑50μL/孔輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250μL/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,在吸水紙上拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
7、顯色:加入底物液A液50μL/孔,再加入底物液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15min。
8、測(cè)定:加入終止液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定每孔OD值(若無(wú)酶標(biāo)儀,則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。