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試劑盒
首頁 微生物檢測 PCR 致瀉大腸埃希氏菌(DEC)核酸檢測試劑盒(PCR-探針法)

致瀉大腸埃希氏菌(DEC)核酸檢測試劑盒(PCR-探針法)

檢測項(xiàng)目:細(xì)菌/真菌

適用樣本:純培養(yǎng)菌株

規(guī)格
50T/盒,25T/盒
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產(chǎn)品介紹
概述

采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),針對(duì)致瀉大腸埃希氏菌(DEC)特異性基因設(shè)計(jì)引物和探針。PCR擴(kuò)增過程中,與模板結(jié)合的探針被Taq酶分解產(chǎn)生熒光信號(hào),熒光定量PCR儀根據(jù)檢測到的熒光信號(hào)繪制出實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線,從而實(shí)現(xiàn)致瀉大腸埃希氏菌(DEC)在核酸水平上的菌株鑒定。

檢測步驟

1、核酸提取????????

加熱法:刮取一環(huán)菌落,懸浮于100μL的無菌水中,漩渦震蕩10s(如果菌落未能均勻分散,可適當(dāng)延長震蕩時(shí)間),95℃或沸水浴5min,冷卻至室溫,12000rpm離心5min,吸取上清。

試劑盒法:可使用商品化的試劑盒提取細(xì)菌的基因組DNA。

2、反應(yīng)體系配置

從試劑盒中取出預(yù)混液,充分融化,渦旋后短暫離心,取20μL置于PCR管或PCR板中,然后各取模板5μL分別加入PCR管或PCR板中(每種模板要使用五種預(yù)混液),蓋好管蓋或板膜,短暫離心,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

3、PCR擴(kuò)增???????

PCR管或PCR板置于PCR儀上,推薦反應(yīng)程序設(shè)定如下:反應(yīng)體系為25μL,在第二步每個(gè)循環(huán)60℃時(shí)檢測熒光信號(hào),檢測通道選擇FAM、HEX(VIC)、CY5。

第一步

第二步

1個(gè)循環(huán)

40個(gè)循環(huán)

95℃

95℃

60℃√

72℃

5min

15s

30s√

30s

注:使用ABI系列PCR儀器,如果不添加ROX,“passive reference”和 “quencher”均選擇“none”。

注意事項(xiàng)
1、實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書,規(guī)范操作。 2、本品各組成成分均不得與其他產(chǎn)品或不同批號(hào)產(chǎn)品中的相應(yīng)組成成分進(jìn)行混用。 3、基因變異可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。 4、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染都可能會(huì)造成假陽性結(jié)果。 5、恰當(dāng)處理實(shí)驗(yàn)過程中的廢棄物和擴(kuò)增產(chǎn)物。
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